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产品简介：
本试剂盒采用独特的缓冲系统，结合传统的异丙醇沉淀法，可快速获得大量高纯度的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA适用酶切、PCR、测序、连接、转化和转染等常规实验。
产品内容：
注：实验前请仔细阅读说明书。
储存条件：
1.该试剂盒常温组分于室温(15～30℃)密封条件下可保存12个月。
2.试剂盒内的RNase A溶液于-20℃可长期保存，4℃可保存12个月。
3.第一次使用时，将RNase A溶液全部加入悬浮液I中混匀，于4℃保存。
注意事项：
1.裂解液II容易产生沉淀，请预先37℃水浴溶解至澄清状态。裂解液II含NaOH，使用后请及时拧紧瓶盖，防止变质。
2.纯化液III请置于4℃冰箱预冷。
3.自备70%乙醇和50mL离心管。
4.质粒的提取量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加I、II、III的用量。
5.建议TE在65～70℃水浴中预热。
操作步骤：
细胞裂解
1.取100～200mL过夜培养的菌液，分次加入同一个50mL离心管中，7500rpm室温离心5～10min，弃上清，收集菌体。为保证上清液全部弃除，可将离心管倒置在干净的吸水纸上。
2.向菌体沉淀中加入10mL悬浮液I(确认已加入RNase A溶液)，通过移液器吹打或涡旋震荡混匀，室温静置3～5min。
3.向上述菌体悬浮液中加入10mL裂解液II，立即缓慢颠倒离心管6～8次，室温静置5～10min左右，此时混合液为澄清状态。
(注意：为避免基因组DNA污染和质粒断裂，请勿剧烈震荡离心管，静置时间勿超过10min。)
4.加入10mL预冷的纯化液III，立即缓慢颠倒离心管6～8次，冰上静置10min。7500rpm室温离心10min。
质粒DNA纯化
1.将离心后的上清液用推杆型过滤柱过滤，转移至新的50mL离心管中。
2.向滤液中加入20mL的促沉液IV，颠倒混匀，室温静置10min。
3.7500rpm室温离心15min(或5000rpm离心30min)。弃上清液(请勿触及离心管壁白色沉淀)，倒置于吸水纸上沥干残余液体。
4.加入5mL 70%乙醇涮洗管壁，7500rpm室温离心5min，小心倒掉上清液(请勿触及离心管壁白色沉淀，如果白色沉淀脱落，可以再次离心)，倒置于吸水纸上沥干残余液体。
5.用0.5～1.5mL TE溶解DNA沉淀，琼脂糖凝胶电泳检测。如需长期保存请置于-20℃。
质粒DNA浓度及纯度检测：
得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为多条带，这些条带是质粒的多聚体造成的，不影响后续的酶切、转染等实验。OD260值为1时，双链DNA约50μg/mL。
纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8～2.0左右，可直接应用于分子生物学等常规操作。如溶解时不使用缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因pH值和离子会影响光吸收值。
相关搜索：沉淀法质粒大提试剂盒(沉淀法)，Plasmid MaxiPrep Kit